Каталог кулинарных сайтов и блогов

1

1001eda.com — Еда: простые вкусные рецепты с фото

1000.menu — Вкусные домашние рецепты приготовления блюд с пошаговыми фото¹

2

2eda.ru — Пошаговые рецепты с фото¹

3

3iuka.no — Oppskrifter med sjømat (рецепты из морепродуктов)

7

7days.ru — Сетевое издание 7 дней

A

AgroDolce.it — Agrodolce

Alimero.ru — Кулинарные рецепты и мастер-классы

AllChoco.com — Все о шоколаде

AllRecipes.com — All Recipes (все рецепты)

AllWomens.ru — Журнал для женщин

Anna.fi/kategoria/ruoka

Arborio.ru — Кулинарные заметки Алексея Онегина

Arla.fi/reseptit/ — Reseptit

AtelierDesChefs.fr — L’atelier des Chefs, des cours de cuisine et des recettes (мастер-классы, кулинарные уроки и рецепты)

B

BackenMachtGluecklich.de — Backen macht glücklich. Die Glücksbäckerei im Netz

Blog.GialloZafferano.it/Community — Blog di Giallo Zafferano

♡ Blog.GialloZafferano.it/Carmencita81/ — Carmencita

Blog.CookAround.com/Community — La community di Blogger di «Cookaround»

♡ Blog.CookAround.com/BarbaraCucina — Barbara Cucina: La Dolce Vita

♡ Blog.CookAround.com/Gaianna — La mia cucina gluten free by Annagaia

♡ Blog.CookAround.com/LaCucinaDiPeppina

♡ Blog.CookAround.com/LaMimosaRosa — La Mimosa Rosa

♡ Blog.CookAround.com/LeRicetteDiZiaMinny — Le Ricette di Zia Minny

♡ Blog.CookAround.com/SaleZuccheroECioccolata — Sale Zucchero e Cioccolata

♡ Blog.CookAround.com/SugarDany — Sugar Dany

♡ Blog.CookAround.com/Vincenzina52 — Pane & Tulipani

♡ Blog.CookAround.com/Vittoria70 — Vittoria70: Trenette,pennette e un qb di fantasia

BonAppetit.com — Bon Appétit Magazine: Recipes, Cooking, Entertaining, Restaurants

C

Calorizator.ru — Правильное питание¹

CanadaCook.ru

ChefMarket.ru — Конструктор ужинов на всю неделю от Шефмаркет. Лучшие рецепты от шеф-поваров, качественные ингредиенты, несколько еженедельно обновляемых меню: Семейное, Фитнес, Баланс, Оригинальное, Быстрое меню. Лучшие пошаговые рецепты, выбор подходящих блюд

ChefSimon.com — Le plaisir de cuisiner

ChocolateNegro.info — Chocolate Negro

Сocina-Сhilena.com — Recetas de Chile

D

DariaSaveleva.com — Кулинарный блог Дарьи Савельевой

DDR-Rezepte.net — Einfache Rezepte aus der DDR & Freundesland

Dela-Ruk.ru — Женский журнал

DetSøteliv.no — Det søte liv: Best på kakeoppskrifter

Dinner-Mom.com — The Dinner♡Mom. Easy & Healthy Family-Friendly Recipes

Dom-Desertov.ru — Дом Десертов

Duxovka.ru — Пошаговые кулинарные рецепты в фотографиях

E

Eat-Me.ru — Съешь меня!

Eco-Recept.ru — Эко рецепты со вкусом

Eda.ru — Еда

Eda.WikiReading.ru — ВикиЧтение. Рецепты и кулинария

EdimDoma.ru — Едим дома

F

FindFood.ru — Кулинарный сайт¹

FoodBest.ru — Домашние рецепты с пошаговыми фото

Food.InMyRoom.ru — Портал о кулинарии

Food.InMyRoom.ru — Портал о кулинарии

FoodIdeas.info — Более 10 000 кулинарных идей для приготовления вкусной и полезной пищи

FoodMan.Сlub

FoodNorway.com — Норвежская кухня

FotoRecept.com — ФотоРецепт¹

G

Gastronom.ru — Гастрономъ

GeniusCook.com — Гениальная кулинария

GreatBritishChefs.com — Great British Chefs

GialloZafferano.it — Ricette di cucina

Good-Cook.ru — Хорошая кухня

Good-Menu.ru — Хорошее меню. Кулинарный сайт Алёны Хохловой

Gotovim-Doma.ru — Готовим дома

Gotovim.ru — Кулинарные рецепты

Gotovte.com — Пошаговые рецепты домашней кухни¹

GrandKulinar.ru — Кулинарный сайт

GreenMe.it — GreenMe

theGuardian.com — Рецепты

GustoBlog.it — Ricette tradizionali ed Originali per piatti sempre nuovi e creativi

H

Hlebopechka.ru — Хлебопечка.ру

Hola.com/Cocina — Las mejores recetas de cocina y recomendaciones

Hot-Spoon.ru — Рецепты на каждый день

I

IamCook.ru — Кулинарные рецепты¹

Ica.se — Recept för vardag & fest

ICookGreek.com — On-line περιοδικό Μαγειρικής Ζαχαροπλαστικής

ItalyanskayaKuhnya.com — Итальянская кухня

IzyskOn.com — Всё о кулинарии

J

Jaymi-Oliver.ru — Рецепты Джейми Оливера

K

KakVarim.ru — Как варить и сколько варить продукты

Kartofan.org — КартоФан. Сайт о картошке

KEdem.ru — Кулинарный Эдем

Kilometre-0.fr — Cuisine de produits de saison et issus de circuits courts

KochBar.de — Kochrezepte

Köket.se — Köket (кухня)

Koolinar.ru — Сайт кулинарных рецептов

Kopilka-Kulinara.ru — Копилка кулинара — простые и быстрые пошаговые рецепты

KtoNaVkusnenkoe.ru — Проверенные пошаговые кулинарные рецепты

Kuharka.ru — Кухарка.ру. Кулинарные рецепты с фотографиями. Мастер-классы и обсуждения

Kuking.net

Kulina.ru — Кулинарные рецепты с фото

Kulinaria1914.ru — Рецепты блюд старорусской кухни

KulinaRoman.ru — Простые и вкусные домашние рецепты с фото

Kushat.net — Кушать.нет

L

LaCocinaDeVirginia.com — Comida casera y rápida de hacer

LaCucinaItaliana.it — La Cucina Italiana: ricette, news, chef, storie in cucina

LaCuisineCEstLuiEtMoi.com — La cuisine, c’est lui… et moi

LaCuisineD’Annie.20minutes.fr — La cuisine familiale: Un plat, Une recette

Lady-Day.ru — Кулинарные рецепты простых блюд с фото для всей семьи

Lecker.de — Rezepte: Kochrezepte | Backrezepte | Kochen | Backen

LeitesCulinaria.com

LifeHacker.ru — Лайфхакер. Советы, лайфхаки, продуктивность, технологии, здоровье

Lozhka.su — Кулинарные рецепты¹

LuxVkus.ru — Отличный вкус. Блог Татьяны Симак

M

MatPåBordet.no — Oppskrifter for alle

MatPrat.no — Oppskrifter for hele familien

Marmiton.org — 70000 recettes de cuisine

Melk.no — Opplysningskontoret for Meieriprodukter

Meny.no — MENY. Nettbutikk, kundeavis, middagstips (Интернет-магазин, рецепты)

MexidoDeIdeias.com.br — Mexido de Ideias

Misya.Info — Ricette facili con foto

MothersBlog.gr — H αγαπημένη συνήθεια των μαμάδων

Multi-Varca.ru

N

Namenu.ru — Кулинарные рецепты с фото, простые и вкусные блюда

NefisYemekTarifleri.com — Nefis Yemek Tarifleri. Kolay ve Pratik Yemek Tarifleri

NordicDiner.net — Recipes and stories from an Oslo kitchen

O

Old-Fashion-Recipe.com — Old Fashioned Recipes

OldFatGuy.ca — A Food Blog by a Fat Old Guy

Open-Cook.ru — Открытая Кухня Анны Нечаевой

Outside-Oslo.com — Outside Oslo

P

PapillesEtPupilles.fr — Papilles et Pupilles, le blog culinaire qui fait voyager

Patee.ru — Пошаговые кулинарные рецепты с фото¹

PicanteCooking.com

Pirogi-i-Torty.ru — Торты и пироги

PtitChef.com — Tous les jours de nouvelles recettes

Posudamart.ru/CookBook — Кулинарные рецепты

Povar.ru — Кулинарные рецепты с фото

Povarenok.ru — Кулинарные рецепты

Рovarixa.ru — Рецепты мяса, рыбы, салатов, первых и вторых блюд, закусок и бутербродов

Povary.ru — Кулинарный портал. Рецепты с фото, рецепты тортов, кулинарные рецепты

ProstoVkusno.md — Молдавский журнал «Просто и Вкусно»

R

Recepty-Salatov.info — Рецепты салатов

Resepty.ru — Простые рецепты

Rewe.de/rezepte-ernaehrung/ — Rezepte & Ernährung

RussianFood.com — Русская еда

Rutxt.ru — Рецепты вкусных блюд для всей семьи

S

SaitKulinarii.info — Сайт кулинарии

Say7.info — Кулинарный сайт Анастасии Скрипкиной

SheLovesBiscotti.com — Простые и вкусные рецепты для всей семьи с итальянской изюминкой

Simply-Yummy.de — Simply Yummy

Sladko-Em.ru — Рецепты для мультиварки¹

Smile-Cook.com — Готовим с улыбкой. Домашние кулинарные рецепты приготовления блюд

SoVkusom.ru — Со вкусом

SteakLovers.menu — Секреты создания идеальных стейков. Еда, рецепты, хитрости поваров

StranaDesertov.ru — Страна Десертов

SunkissedKitchen.com — Sunkissed Kitchen. Clean Eating & Gluten-Free Recipes

Sypchik.ru — Кулинарные рецепты домашней кухни¹

T

TasteAtlas.com — World Food Atlas (всемирный продовольственный атлас)

TasteLine.com — Рецепты, еда, напитки

TheSpruceEats.com — The Spruce Eats. Make Your Best Meal

Therawtarian.com — Simple, Satisfying Raw Food Recipes (простые рецепты, сыроедение)

Tine.no/Oppskrifter — Oppskrifter

TVEda.ru — Телеканал Еда. Домашние рецепты

Y

Ye-Mek.net — Yemek Tarifleri

V

Vcusnyatina.ru — Вкусные домашние рецепты с пошаговыми фото

Vkuso.ru — Простые рецепты приготовления блюд с фото

Vkusvill.ru — Магазин «ВкусВилл»

VVpuzo.com — Кулинарные рецепты¹

VsyaSol.ru — Рецепты, кулинарные путешествия, истории из мира кулинарии

W

W-Say.ru — Новости, статьи и рецепты для современной женщины¹

WDay.ru — Женский журнал Woman`s Day

Webpudding.ru — Пошаговые кулинарные рецепты с фотографиями

WebSpoon.ru — Пошаговые кулинарные рецепты с фото¹

WowCook.net — Рецепты с пошаговыми фото. Самые вкусные кулинарные рецепты, которым можно доверять

К

КоллекцияРецептов.рф — Кулинарный блог

Примечаниe:

1. На сайте можно заработать, опубликовав свой рецепт.

Кулинарные Рецепты Россия

(Просмотры: 2426;Сайт добавлен: Sep 19, 2013, кулинарные-рецепты)

Подробные фото-видео рецепты кулинарных блюд, от простых в приготовлении до усложнённых!

(Просмотры: 1680;Сайт добавлен: Oct 25, 2013, кулинарные-рецепты)

На женском портале, самая актуальная и интересная информация из мира моды, здоровья и красоты, лучшие кулинарные рецепты, советы молодым мамам и многое другое для женщин

(Просмотры: 1051;Сайт добавлен: Oct 31, 2013, кулинарные-рецепты)

Лучшие кулинарные книги мира на русском языке по издательским ценам от издательства гастрономической литературы «Чернов и Ко»: Ларусс гастрономик, книги Алена Дюкасса, Пьера Эрме, Жоэля Робюшона

(Просмотры: 617;Сайт добавлен: Oct 29, 2013, кулинарные-рецепты)

Кулинарные рецепты с фотографиями на ДадаЕда

(Просмотры: 551;Сайт добавлен: Nov 8, 2013, кулинарные-рецепты)

Кулинарные рецепты блюд с фотографиями — 1000 рецептов собранных в одном месте. Рецепты приготовления блюд, выпечка, салаты, десерты, домашние заготовки, первые и вторые блюда. На нашем сайте о кулинарии представлено более 1000 рецептов с фотография

(Просмотры: 471;Сайт добавлен: Nov 7, 2013, кулинарные-рецепты)

Женский блог. Все о моде, красоте, здоровье. Кулинарные рецепты, уход за детьми и как себя вести с мужчиной.

(Просмотры: 417;Сайт добавлен: Oct 16, 2013, кулинарные-рецепты)

Рецепты от Кулинарушки — это вкусные блюда, которые готовим по оригинальным кулинарным рецептам. Причем, готовим дома. Кулинария высшей пробы.

(Просмотры: 413;Сайт добавлен: Nov 7, 2013, кулинарные-рецепты)

Кулинарные рецепты. рецепты с фото, рецепты салатов, фото рецептов, рецепты закусок, вкусные рецепты

(Просмотры: 412;Сайт добавлен: Oct 16, 2013, кулинарные-рецепты)

У нас Вы найдете апетитные, простые и оригинальные рецепты на праздник и на каждый день как домашней кухни так и от известных кулинаров. Лучшие рецепты с фотографиями и советами по их приготовлению. Готовьте вместе с нашим сайтом.

(Просмотры: 378;Сайт добавлен: Oct 22, 2013, кулинарные-рецепты)

Простые, вкусные и полезные рецепты для людей с изысканным вкусом. Рецепты с фото и подробным описанием

(Просмотры: 366;Сайт добавлен: Oct 31, 2013, кулинарные-рецепты)

коллекция старых советских открыток, советские песенники с нотами, кулинарные рецепты, события второй мировой войны, история парусных кораблей, астрологические изыскания, гадания на картах таро, ритуалы вуду, маятник для начинающих, понятия нумерологи

(Просмотры: 352;Сайт добавлен: Sep 28, 2013, кулинарные-рецепты)

Как приготовить вкусные салаты, блюда из мяса, омлет, салат мимоза, как приготовить мясо по-французски, пирожное картошка, салат оливье, лечо, рецепты салатов и

(Просмотры: 342;Сайт добавлен: Nov 8, 2013, кулинарные-рецепты)

Независимое интернет-телевидение Курска. Афиша. Здоровье. Кулинарные рецепты. Корпоративная реклама

(Просмотры: 340;Сайт добавлен: Sep 19, 2013, кулинарные-рецепты)

Зеленая поляна — интернет-магазин натуральных здоровых продуктов в Перми. Продукты для похудения. Мастер классы. Кулинарные рецепты.

(Просмотры: 328;Сайт добавлен: Oct 28, 2013, кулинарные-рецепты)

Рецепты приготовления первых, вторых блюд, салатов, выпечки с фото.

(Просмотры: 316;Сайт добавлен: Oct 21, 2013, кулинарные-рецепты)

Освещены темы: кулинария, питание, кулинарные рецепты блюд из мяса, печени, рыбы, творога, овощей, здоровое питание, правильное питание, здоровье и красота, рецепты фото, заготовки на зиму, выпечки

(Просмотры: 314;Сайт добавлен: Sep 27, 2013, кулинарные-рецепты)

Сборник уникальных кулинарных рецептов. Рецепты из НЕинтернет источников. Кулинарные рецепты, которые действительно «работают» :), т.е. рецепты, по которым можно действительно приготовить вкусное блюдо!..Немного о навигации по сайту:.в верхн

(Просмотры: 305;Сайт добавлен: Oct 16, 2013, кулинарные-рецепты)

Кухарка.ру — Проверенные кулинарные рецепты с фотографиями, масленица, рецепты блинов, пасха, рецепт

(Просмотры: 305;Сайт добавлен: Oct 16, 2013, кулинарные-рецепты)

сайт о приготовлении блюд и народной медицине

(Просмотры: 301;Сайт добавлен: Oct 24, 2013, кулинарные-рецепты)

Увлекательная кулинария — кулинарные рецепты, тесты, игры, конкурсы, истории. Соусы, закуски, бутерброды, салаты, супы, вторые блюда, гарниры, выпечка, консервирование, десерты, напитки, коктейли.

Домашние пельмешки по рецепту Алены Хохловой

Поделиться:

Всем привет!
Домашние пельмени несомненно одно из вкуснейших блюд! Но вариантов теста, как оказалось, достаточно много и выбрать сразу не так просто)))
Сегодня мы попробовали рецепт от Алены Хохловой, на который наткнулись на одном из кулинарных сайтах.
Пельмешки получаются очень вкусные, с сочной начинкой!

Итак…
Ингредиенты:
500 гр. пшеничной муки высшего качества
2 яйца
1 стакан молока (200 мл.)
1 ст.л. подсолнечного масла
1 ч.л. соли
для начинки:
500-600 гр. мясного фарша
1 крупная луковица
перец черный свежемолотый
соль
растительное масло
лавровый лист (по желанию)
Горкой высыпаем на стол муку. Сразу добавляем соль. В центре мучной горки делаем небольшое углубление. Добавляем столовую ложку подсолнечного масла. Именно благодаря наличию масла тесто приобретает мягкость и пластичность.
В большой чашке взбиваем два яйца, добавляем теплое молоко. В зависимости от наличия ингредиентов вместо двух средних или мелких яиц в тесто для пельменей можно положить одно крупное яйцо. Часть молока можно заменить водой.
Молочно-яичную смесь выливаем в углубление в муке. Замешиваем тесто.
Когда тесто образует комок и начнет отходить от стенок миски, выкладываем его на стол и продолжаем вымешивать уже на столе.
Очень хорошо вымешиваем тесто. Тесто для пельменей должно быть одновременно упругим и податливым, не прилипать к столу и к рукам.
Важно!!! Если во время вымешивания тесто требует еще муки, то муку добавляем по чуть-чуть, чтобы тесто не получилось слишком крутым.
Когда вам кажется, что тесто на пельмени уже готово, смачиваем руки подсолнечным маслом и еще раз хорошенько вымешиваем. Кстати, у кого есть хлебопечка, то работу по вымешиванию теста можно поручить машине ))). Получается не только быстрее, но и чище)))
Если чувствуете, что тесто получилось слишком крутое (иногда такое бывает, если положили много муки и мало жидкости), то добавляем еще немного масла. От этого тесто для пельменей только улучшится.
В итоге у нас должно получиться достаточно мягкое и одновременной упругое тесто. Кстати, точно такое же тесто можно делать на вареники, чебуреки или лазанью.
Накрываем тесто чистым полотенцем (или заматываем в пищевую пленку) и оставляем на столе хотя бы на пол часа. Это очень важный момент, и пропускать его не стоит. Эта отлежка теста необходима, чтобы клейковина как следует разбухла, и пельменное тесто получилось клейким. А когда тесто на пельмени хорошо клеится, то и лепить пельмени в радость, одно удовольствие, и при варке такие пельмени не распадаются.
Фарш делаем такой, какой любим. есть один секрет, благодаря которому начинка получается вообще необыкновенная. Для этого надо отварить в небольшом количестве воды два-три лавровых листа. Остывший навар, грамм сто, добавляем в начинку для пельменей. Попробуйте, вы сами заметите насколько нежным и вкусным получается мясной фарш.
Вот и все, начинка и тесто на пельмени готовы!
Источник: http://www.good-menu.ru/carne/pelmeni17.html

Спасибо всем, кто заглянул!

Ой! Кажется, что-то сломалось! Попробуйте посмотреть в других разделах!

1. Главная
2. Ой! Кажется, что-то сломалось! Попробуйте посмотреть в других разделах!

oops !

Ой! Кажется, что-то сломалось! Попробуйте посмотреть в других разделах!

Товар успешно добавлен в корзину!

Ваша заявка отправлена! Скоро, менеджер магазина свяжется и ответит на все вопросы

Как мы работаем:

Вы складываете в корзину интересующий Вас товар в любом количестве и размещаете заказ, указав при этом свой номер телефона и адрес электронной почты. В течении короткого времени с вами свяжется наш продавец-консультант и подробно расскажет об особенностях и преимуществах того или иного продукта, и обязательно порекомендует что-то по Вашему вкусу и поможет определиться с количеством (весом) товара.

Затем Вы получите письмо с точным весом Вашего заказа по всем позициям и ссылку на безопасную оплату. Заказ доставляется на следующий день.

Благодаря нашему сервису Вы можете делать заказы мелким оптом объединив заказы с Вашими друзьями и родственниками, соседями и коллегами, знакомыми и участниками ДНП, садоводств и т.д. Ведь на обьем от 10 тыс. руб обязательно будет дополнительная скидка до 10% — это еще выгоднее.

Для жителей Ленинградской области Мы рекомендуем обьединять заказы для экономии на доставке. Сделать это очень просто: каждый покупатель размещает свой заказ и указывает один и тот же адрес, наш персонал уточняет все подробности по заказу и объединяет их в одну доставку до указанного адреса. При этом все уже будет расфасованно для каждого в отдельности.

У нас есть возможность доставлять качественные продукты по всей территории Ленобласти.

Условия доставки описаны в разделе «Доставка» или с большим удовольствием наш сотрудник сделает расчет.

Торт медовик пошаговый рецепт с фото со сметанным кремом 🍓

Нежный и воздушный торт «Медовик» с потрясающим ароматом меда — это торт из детства. Стоит только вспомнить о Медовике, как сразу же всплывают в памяти детские дни рождения: большой торт со свечками и этот незабываемый медовый вкус, который не спутаешь ни с чем. Сейчас в продаже огромный выбор готовых тортов, но домашний торт Медовик был и остается одним из самых популярных. Причем народную любовь он сыскал не только благодаря изысканному вкусу, далеко не последнюю роль играют дешевизна и доступность ингредиентов, а также простота приготовления. Именно поэтому рецепт Медовика так полюбился хозяйкам, должна сказать, что и у меня этот тортик в разряде самых любимых))) Итак, делюсь рецептом Медовика со сметанным кремом.

Ингредиенты:

• коржи для Медовика:
• 100 гр. сливочного масла
• 1 стакан сахара
• 2-3 ст.л. натурального меда
• 1 ч.л. соды
• 3 шт. куриных яиц
• 2 стакана муки
• сметанный крем:
• 800 гр. жирной сметаны (жирность не менее 30%)
• 1 стакан сахара
• украшение для торта:
• 1 стакан грецких орехов

Приготовление коржей для Медовика

Сметанный крем для Медовика

Сборка торта Медовик

Приятного аппетита! Вкусные и полезные рецепты от Алены Хохловой

C этим рецептом смотрят

Отзывы и комментарии:

Ой, какой вкусный получился медовик. Все гости меня хвалили. Хорошо, что я остановила свой выбор именно на вашем рецепте. Спасибо.

Интересная технология формирования каждого отдельного коржа. Наверное, очень ускоряет процесс выпечки. Надо будет попробовать.

Светлана, раньше на Медовик я делала обычное тесто и затем раскатывала коржи, но когда попробовала новый способ, то к старому уже не захотела возвращаться. Из жидкого теста торт готовится намного быстрее, да и коржи получаются нежнее.

Во вторник у внучки День рождения, решила испечь ваш медовик.

Спасибо за рецепт, торт всем понравился.

Медовик получился просто чудо! Такого воздушного и ароматного торта я еще не пекла. Очень хороший, внятный рецепт!

Ольга Васильевна 01.12.14

Рецепт порадовал, особенно ноу-хау с намазыванием теста на пекарскую бумагу. Действительно намного быстрей, чем раскатывать коржи, а затем переносить их на противень. И сами коржи можно делать очень тонкими. Спасибо.

Шикарный получился торт. Нежнейший, прекрасно пропитанный! Добавляла ещё чернослив. Буду готовить только так, без раскатки коржей! Спасибо огромное!

Елена, и Вам большое спасибо за отзыв. Рада, что «Медовик» понравился)))

Ваш торт — это просто чудо. Первый раз пекла и все получилось просто великолепно, брала двойною порцию и делала большой торт, а крема хватило даже остался))) Спасибо Большое за рецепт.

Вкусные коржи. Способ выпечки просто находка! Раньше приходилось каждый корж раскатывать, всё равно получались разные, всЯ кухня в муке. А тут секундное дело. Спасибо автору. Всем советую попробовать.

урааа! . нашла рецепт на жидком тесте. буду пробовать ))))

Cвета, попробуйте, надеюсь, Вам понравится)))))))))

Коржи и впрямь супер! Отдельная благодарность за секрет как не раскатывать коржи)))

Замечательный торт получился! спасибо огромное за рецепт! теперь медовик буду готовить только по вашему рецепту!

Спасибо за рецепт. Уже второй торт пеку по Вашим рецептам. Спасибо за внятность в описании, для таких рукопопых как я, на второй раз вдохновения может и не остаться, а с Вами с первого раза я зэ бэст!

Шикарный рецепт! Теперь этот торт мое коронное блюдо! Очень нужный, тает во рту. Намазывание коржей действительно находка. Всегда думала, что медовик это очень сложно. Спасибо большое! Алена, подскажите, пожалуйста, рецепт крема с творогом? Хочу сделать бисквит с творожным кремом для ребенка, чтобы был максимально полезным, если это слово подходит для торта))))

Асия, спасибо за отзыв)))). Для творожного крема берется домашний мягкий творог (не кислый) и перетирается со свежими сливками при помощи блендера до получения кремообразной массы. Количество сливок зависит от влажности творога. Сахар по вкусу. Вместо домашнего творога можно купить детский творожок, обычно он хорошо перетерт, без комочков.

у очень вкусный торт. Воздушный и просто тает во рту. И делается просто и быстро. Хоть я и не любитель медовика, но этот торт просто бомба.

Виктория, спасибо за отзыв, рада, что тортик понравился))))))

У меня не посветлела смесь((((

Маша, причин может быть несколько: если мед светлый, то эффект посветления массы может быть не очень заметен, важно, чтобы смесь увеличилась в объеме и стала более воздушной. Также причиной могла быть низкая температура смеси. Ничего страшного, продолжайте печь Медовик))))

Рецепт изумительный! Приготовление занимает совсем немного времени, а результат порадует — всегда вкусно! Коржи пропитавшись кремом увеличиваются в два раза и торт получается настолько нежным, что мгновенно исчезает с тарелочки и можно не успеть насладиться чудо-лакомством)

Катерина, большое спасибо за отзыв, рада что медовичок понравился )))

Подскажите пожалуйста, сколько мл у вас стакан?

Алена, использую стакан объемом 250 мл.

Спасибо за рецепт, пекла уже несколько раз, всегда получается очень-очень вкусно. Жду очередного повода, чтобы снова полакомиться этим тортиком!

Маргарита, большое спасибо за отзыв ))))))

ФГБОУ ВО «МГУПП»

Хохлова Наиля Фархатовна

директор

Колмыкова Елена Алексеевна

заместитель директора по учебно-методической работе

Общие сведения

Федеральной службой по надзору в сфере образования и науки (Рособрнадзор) подписан приказ № 978 от 10.07.2019, подтвердивший аккредитацию образовательных программ среднего профессионального образования МГУПП.

В 2018 учебном году в МГУПП начата подготовка кадров по образовательным программам среднего профессионального образования на базе Международного технологического колледжа МГУПП. Сделан первый набор студентов.

Для реализации учебного процесса, практической и внеаудиторной работы студентов колледж располагает соответствующей материально-технической базой: современное оборудование, специализированные лаборатории и мастерские, аудитории для изучения профессиональных дисциплин, актовый зал, компьютерные классы. Обучение студентов колледжа идет на базе лучших лабораторий МГУПП.

Преподают в колледже ведущие специалисты профессорско-преподавательского состава университета, которые обладают большим опытом работы на производстве и высокой квалификацией. В действующий состав преподавательского состава Международного технологического Колледжа входят педагоги и мастера производственного обучения. Среди которых доктора технических наук 4 педагога, 1 доктор педагогических наук, кандидаты технических наук 10 педагогов, кандидаты биологических наук, химических наук, экономических наук 3 педагога, преподаватели высшей квалификационной категории 2 педагога.

Организация системы подготовки специалиста на основе реализации основных образовательных программ в соответствии с ФГОС СПО и требованиями работодателей, использование новых форм организации образовательного процесса, способствующих индивидуализации обучения, направленного на развитие профессионально значимых личностных качеств и компетенций, являются приоритетными направлениями деятельности колледжа.

Образовательная деятельность на 2020/2021 год

Результаты олимпиады МТК

Педагогический состав

Педагогический состав предметной (цикловой) комиссии Общеобразовательных и социально-гуманитарных учебных дисциплин экономического цикла

Председатель — Лаптева Елена Александровна

Зам. председателя – Крюкова Елизавета Вячеславовна

Секретарь – Татьянок Алеся Григорьевна

Члены комиссии

Педагогический состав предметной (цикловой) комиссии профессиональных дисциплин

Председатель – Токарева Татьяна Юрьевна

Зам. Председателя – Гришакова Елена Александровна

Секретарь – Шатровский Евгений Игоревич

Члены комиссии

Оксфорд Читай и открывай Чудесную воду Хохлова Алена Хохлова Алена школа № 48 школа № 48 Омск Омск Читай и открывай Чудную воду Хохлова.

Презентация на тему: «Оксфорд, читай и открой чудесную воду Хохлова Алена Хохлова Алена школа № 48 школа № 48 Омск Омск Прочти и открой чудесную воду Хохлова» — стенограмма презентации:

1 Оксфорд Читай и открывай Чудесную воду Хохлова Алена Хохлова Алена школа № 48 школа № 48 Омск Читай и открывай чудесную воду Хохлова Алена Школа 48 Омск

2 Но более чудесным, чем знания стариков и знания книг, являются тайные знания океана (Х.П.Ловеркрафт, писатель) Без воды нет жизни! Вода везде! Во всех сферах нашей жизни!

3 Для чего мы используем воду? для?

4 Для нашего тела Для нашего тела

5 пить питьевой

6 мытье посуды мытье посуды

7 плавание плавание

8 купание купание

9 чистка зубов чистка зубов

10 приготовление пищи

11 полив полив

12 рыбалка рыбалка

13 парусный спорт

14 транспорт транспорт

15 животные животные

16 животные 2 животные 2

17 Экономия воды Экономия воды

18 Как сэкономить воду Как сэкономить воду

19 Другая вода Разная вода Свежая Свежая соль Соль Глубоко Глубоко Ложно Ложно Все еще ясно Ясно Стоит Стоит Тревожно и опасно Тревожно и опасно

20 Наводнение и цунами Наводнение и цунами Жизнь на океанской волне! Дом на холмистой глубине, Где бушуют разбросанные воды, И ветры держат их веселье!

21 год Спасибо за внимание!

Ольга Хохлова, трагическая первая жена Пабло Пикассо, — загадка не более

Она была забытой женой Пикассо, вычеркнутой из истории как «невротичная», снобистская депрессивная, которая была обузой для великого художника.

Но новая выставка проливает совсем другой свет на Ольгу Хохлову, его первую жену, с которой он отказался развестись, потому что не хотел делить с ней свои работы и свое огромное богатство.

Опираясь на ранее невиданные письма, фотографии и фильмы из частных архивов семьи Пикассо, Ольга оказала большое влияние на величайшего художника 20-го века.

Пикассо безумно влюбился в красивую русскую балерину в 1917 году, увидев ее танец в «Параде» Сергея Дягилева, Эрика Сати и Жана Кокто, для которого он создал декорации и костюмы.

Выставка в музее Пикассо в Париже — первая, посвященная Ольге — показывает, как она была его главной моделью и музой на протяжении всего его классического периода.

Сначала его взгляд на нее был плотским, но со временем, когда его пыл остыл, он изобразил ее меланхоличной, часто сидящей или читающей.

Позже, когда их брак распался в 1920-1930-х годах, Ольга изображена как «деформированная» и искаженная болью и сожалением.

«Открывает свою жизнь»

К тому времени Пикассо вел двойную жизнь, увлекшись пышной 17-летней француженкой Мари-Терез Вальтер, которую он подобрал на улице.

На одной яркой фотографии, сделанной Пикассо в его студии, стройная и элегантная Ольга запечатлена сидящей на стуле, за которым вырисовывается обнаженная сладострастная Мария-Тереза, которая — без ведома Ольги — заменила ее в его постели.

Внук Ольги Бернар Руис-Пикассо сказал AFP, что письма и фотографии семьи позволяют «по-настоящему увлекательно изучить прямые связи между художником, его работами и тем, что на него влияло в то время».

Друг и биограф Пикассо, британский историк искусства сэр Джон Ричардсон, охарактеризовавший Ольгу как «довольно невротичную», уже назвал эту находку «откровением и совершенно поразительным. Это открывает его жизнь », — сказал он.

Пикассо часто осуждали как женоненавистника-мачо, чье половое влечение и эгоизм оставили за ним разрушительный след — Мари-Тереза, его вторая жена Жаклин Рок и внук покончили жизнь самоубийством.

Но куратор Эмилия Филиппот сказала, что документы показывают более тонкое представление о его отношениях с Ольгой: в одном домашнем фильме показано, как она срывает лепестки ромашки и произносит слова: «Он любит меня, он не любит меня.»

« Очень загадочная женщина »

«Она очень загадочная женщина. На его портретах и ​​фотографиях она мало улыбается … но когда вы видите ее в фильмах, она на самом деле очень веселая и похожа на девушку. Она танцовщица, всегда наряжается и играет с собаками ».

Руис-Пикассо сказал, что из ее писем явствует, что у Ольги были веские причины для грусти и озабоченности.

Родилась на территории современной Украины. Ее отец — полковник российской императорской армии — исчез в хаосе большевистской революции.

Пока они с Пикассо поднимались по социальной лестнице в Париже, ее семья теряла все.

Пикассо идеализировал Ольгу на холсте как образец идеального материнства после рождения сына Пауло в 1921 году, но вскоре отношения пошли на убыль.

«Она была известна своими приступами ревности, и, очевидно, в отношениях существовала реальная напряженность», — сказал Филиппот.

«Но я думаю, что Пикассо любил и уважал ее. Он тоже был пленником их положения, которое он выразил, сравнивая себя с Минотавром, заключенным в тюрьму мифологическим получеловеком-полубыком.

Пара рассталась в 1935 году, но все еще финансово зависела от него. «У Ольги были серьезные проблемы с принятием разлуки», — добавил Филиппот.

«Она была очень одинока и много страдала.После войны, когда Пикассо поселился на юге Франции, Ольга следовала за ним, переходя из отеля в отель, живя на чемодане », а Пауло стал шофером своего отца.

«Она отправляла Пикассо маленькие открытки с фотографиями Пауло и внуков, как будто они все еще были семьей».

Но Пикассо «никогда не отвечал на ее письма» и ничего не хотел от примирения и обычной семейной жизни, к которой стремилась Ольга.

Отмеченная многими друзьями Пикассо как «сумасшедшая», она умерла от рака на французском средиземноморском курорте Канны в 1955 году.Четыре года спустя Пикассо женился на Роке, которую он одержимо рисовал до своей смерти в 1973 году.

Выставка продлится до 3 сентября.

Следите за @htlifeandstyle, чтобы узнать больше

портретов супружеских пар | Ярмарка тщеславия

Буржуазная жизнь

4 февраля 1921 года Ольга родила сына, которого назвали Полом «Пауло» Жозефом (в честь его отца Пабло и деда Дона Хосе). Крестными родителями были Мисия Серт и богатый аргентинский поклонник Пикассо Жорж Бемберг, который должен был пригласить испанского архиепископа председательствовать на церемонии.Гертруду Стайн, которую Пикассо называл своим «пард», не просили быть крестным отцом. Они поссорились: «Ни один из них никогда не знал, о чем», — писала Гертруда в своей «Автобиографии Алисы Б. Токлас» .

Сначала Пикассо был счастлив иметь сына, единственного наследника мужского пола, рожденного в его ветви семьи. Картины и рисунки младенца на руках у матери свидетельствуют об отцовской гордости и любви. К сожалению, Ольга стала одержимо чрезмерно опекающей родительницей и вела себя так, как будто рождение сына и наследника дало ей право на большое уважение как к жене ведущего художника мира.Отныне она будет играть роль мадам Пикассо, как если бы это приносило славу. Богемный в душе Пикассо пытался приспособиться к ее представлениям о том, как должен жить знаменитый художник. Он гордился Ольгой и атмосферой, которую она создавала, но это удовольствие все больше подвергалось нападкам со стороны бывших друзей. Увидев фотографию Пикассо в костюме тореро, сделанную Ман Рэем на одном из грандиозных балов Этьена де Бомона, Брак сказал: «Я должен узнать этого джентльмена». Чтобы противостоять критике, Пикассо обвинил свою жену.«Понимаете, Ольга любит чай, икру, выпечку и так далее, — сказал он одной из своих моделей. «Я люблю колбасу и бобы». Примерно в это же время друг заметил, что Пикассо смотрит на себя в зеркало и бормочет: « Comedia. ”

Рождение сына привело к коренным изменениям в творчестве Пикассо. В течение лета 1921 года, которое он провел в арендованном доме в Фонтенбло, он выполнил ряд огромных, тщательно обработанных картин с изображением здоровенных обнаженных фигур, вдохновленных классическими скульптурами, которыми он восхищался в музее Неаполя.Модернисты критиковали это возвращение к репрезентационализму, но две не менее значительные кубистские картины под названием « Три музыканта, », над которыми он работал одновременно, показывают, что он видел эти совершенно разные стили как две стороны одной медали.

Импульс, возникший в течение лета в Фонтенбло, перенес его в следующий год. Вернувшись в квартиру на улице Боэти, он изо всех сил старался исполнять роль послушного мужа и отца, но иногда скучность этих обязанностей и русская болтовня соратников Ольги по балету становились невыносимыми, и он уходил и катался по бульварам. .Затем, в октябре, в его жизнь вошла привлекательная американская пара Джеральд и Сара Мерфи, которые в течение следующих трех-четырех лет оживляли ее.

Летом 1922 года, который семья Пикассо провела в северном курортном городке Динар, Ольга тяжело заболела. Природа ее болезни никогда не разглашается. Вместо того, чтобы иметь какое-либо отношение к ноге, это было, по-видимому, первым проявлением гинекологических проблем, которые омрачили всю ее оставшуюся жизнь — «женские проблемы», как говорили друзьям.В середине сентября ее должны были срочно доставить в Париж для срочной операции. Пикассо пришлось нелегко ехать в город, он справлялся с автомобильной болезнью Пауло, прикладывая пакеты со льдом к вискам Ольги. Сангвинический рисунок Ольги, сделанный примерно в середине сентября, показывает, что она выглядит изможденной и больной. Очевидно, этот рисунок имел пагубное значение для Пикассо: 41 год спустя он подарил его своему сыну Пауло на Рождество — по-видимому, единственная работа, которую он когда-либо писал ему. Было бы намного больше репрезентативных изображений Ольги, но ни один из них не проявляет тоску, которая делает это таким запоминающимся.После операции Ольги Пикассо вернулся в Динар, чтобы забрать свои работы. Его возвращение привлекло внимание: находясь в Париже, он купил новую дорогостоящую машину и нанял водителя. Это была модная машина Panhard, достаточно внушительная, чтобы о ней написали в газете Dinard. С тех пор все, что делал Пикассо, было новостью.

Приобретение Пикассо автомобиля с водителем приписывается Ольге. Многие из его товарищей-художников и друзей-писателей приобрели дорогие автомобили — по большей части родстеры или гоночные автомобили, — но всегда сами водили их.У Фрэнсиса Пикабиа было около 15 лучших моделей; Андре Дерен владел Рено и гоночным Бугатти; У Брака была Альфа Ромео. В отличие от большинства своих друзей-художников, Пикассо отказывался учиться водить машину. Позже он сказал Франсуазе Жило, что боялся испортить гибкость своих рук и запястий. Пикассо подумал, что если художник мог позволить себе купить машину, он должен иметь возможность нанять шофера.

Изменение отношения Пикассо к Ольге отражается в его портретах после ее выздоровления.В них есть печаль, которая подтверждает то, что Пикассо сказал Жилоту: «он пытался успокоить свою жену, заставляя ее сесть вместо него». Ольга фигурирует на ранних портретах своего мужа как трофейную жену, а не как сексуально желанную женщину. Три тщательно обработанные картины ее в голубом платье с меховым воротником, которые он написал в 1923 году, — это не столько изображения, сколько идеализации — стилизация великих французских пастелистов XVIII века. Она по-прежнему была предметом восхищения и гордости Пикассо, но его влечение к ней, очевидно, остывало.

Многочисленные портреты сына Пикассо более живы, чем портреты его матери. Пауло фигурирует в самых разных костюмах и позах: на осле, с игрушечным ягненком, с лошадью или на автомобиле. Однажды Пикассо взял модель автомобиля своего спящего сына и перекрасил ее в яркие цвета, добавив подушки trompe l’oeil и клетчатый ковер на полу. Когда Пауло проснулся, он был в ярости. Отец был недоволен тем, как Ольга баловала и присматривала за мальчиком. Его воспитание в руках учителей музыки, учителей танцев и т.п. стало еще одним яблоком раздора.Как и его отец, сын будет возмущаться Ольгой и в конечном итоге возненавидеть ее.

Теперь, когда Пикассо были столпами бомонда, они были обречены на постоянный круговорот модных функций. В канун Нового 1922 года они были гостями на вечеринке, устроенной родственниками Поля Розенберга, Жаком Хельфтсом, торговцами серебром. Все носили маскарадные костюмы, кроме Пикассо, который любил наряжаться только до тех пор, пока это не было обязательным. Ольга надела пачку; Розенберг поехал шофером. Пикассо был настолько впечатлен старинным французским серебром на обеденном столе семьи Хелфтс, что спросил, может ли он купить набор ножей, вилок и ложек 18-го века.Хелфт отвел его в хранилище, и сделка была заключена. Пикассо подарил Хелфту акварель с изображением ножа, вилки и ложки в память о покупке.

Лето 1923 года станет историческим не только для Пикассо и его друзей Мерфи, но и для будущего Лазурного берега. Прося владельца Hôtel du Cap на Антибах, который до сих пор был ограничен зимним сезоном, оставить несколько комнат открытыми на лето, две пары невольно превратили Ривьеру в круглогодичный курорт.Мёрфи были слишком искусны в организации угощений для своих детей и друзей. Пикники на пляже, прогулки на лодках, охота за сокровищами, танцы, ужины на свежем воздухе и коктейльные вечеринки оставляли Пикассо мало времени для работы. Как бы ему ни нравилась американская радость жизни Мерфи, он в конечном итоге устанет от постоянных коктейлей, шуток на языке, который он не понимал, и эгоистичного поведения литературных друзей Мерфи Ф. Скотта Фицджеральда и Эрнеста Хемингуэя. .Сара Мерфи является образцом для некоторых рисунков и пары картин на песке, но нет никаких оснований утверждать, что Пикассо одержимо влюбился в нее, что было придумано бывшим директором Нью-Йоркского музея современного искусства. Сара была известна своей добродетелью, а Пикассо не любил романов с женщинами, у которых были дети. В последующие лета он арендовал собственную виллу и дистанцировался от дома развлечений Сары, наполненного знаменитостями, Villa America.

В конце лета 1923 года Пикассо завладел этажом над своей квартирой в Париже.Это означало, что у него было собственное царство и собственная входная дверь, и он мог вести гораздо более независимую жизнь. Сюда не пускали горничных, и даже Ольге приходилось спрашивать разрешения, если она хотела навестить его. Классицизм Ingresque, который соответствовал ее консервативному характеру, вскоре уступил место более революционному, более метаморфическому стилю. Образ жизни Пикассо последовал его примеру. Он вернулся к своей старой привычке посещать бордели и путешествовать по бульварам Гранд.

Треугольник

Без ведома друзей семейная жизнь Пикассо начала распадаться в январе 1927 года.Однажды вечером, гуляя по улицам в поисках l’amour fou, , 45-летний художник наткнулся на femme-enfant своей мечты, которая шла по магазинам в Galeries Lafayette. Она была юной блондинкой с пронзительными кобальтово-голубыми глазами и рано развившимся сладострастным телом — большой грудью, крепкими бедрами, мягкими коленями и ягодицами, как у каллипигийской Венеры. Физически девушка была полной противоположностью худощавой Ольге, а также мальчишеским плоскогрудым хлопушкам, чей внешний вид был модным в середине 1920-х годов.Мари-Терез Леонтин Вальтер было 17 лет, и в течение следующих девяти лет она была самой большой любовью Пикассо.

В 1972 году, за год до смерти Пикассо, Мария-Тереза, которая была необычайно откровенной, позволила взять интервью у Лидии Гасман, единственного ученого, успешно расшифровавшего образы Пикассо. Гасман особенно преуспел в том, чтобы завоевать доверие Мари-Терезы и убедить ее беспрепятственно рассказать о своих отношениях с Пикассо. Мари-Тереза ​​рассказала Гасману, как Пикассо обратился к ней при их первой встрече.Его широкая улыбка, красивый красно-черный галстук, широкое золотое кольцо от дорогого зонта и огромные гипнотические глаза мгновенно обезоружили ее. Она вспомнила, как он сказал: «У тебя интересное лицо. Я хочу сделать ваш портрет. Я чувствую, что вместе мы сделаем великие дела ».

«Я Пикассо», — объявил он, но это имя ничего не значило для Мари-Терезы, поэтому он отвел ее в книжный магазин и показал ей книгу о нем. Она сказала, что тот факт, что он художник, тронул ее, «потому что у моей матери был большой роман с художником.Комментарий Пикассо о ее красоте доставил Мари-Терез особое удовольствие. Ее семья — три сестры, которые жили со своей матерью-одиночкой в ​​доме на берегу реки на окраине Парижа — всегда дразнила ее за уродливый «греческий» нос вместо милого парижского носа retroussé .

Пикассо «занятия любовью [были] временами устрашающими и ужасными, — призналась Мари-Тереза, — [но] в конце концов они были полностью удовлетворены…». [Он] был очень «мужественным» ». Что его волновало, так это то, что он обладал абсолютной психологической властью над ней, как показывают его образы.Хвастовство Пикассо поэту Полю Элюару — «Вы знаете, в моих любовных делах всегда было много скрежета и страданий: два тела, опутанные колючей проволокой, терлись друг о друга, разрываясь на куски» — тоже не следует воспринимать. шутки в сторону. Художник хотел перехитрить однокурсника «божественного маркиза».

Чтобы скрыть Мари-Терезу от Ольги, Пикассо снял квартиру недалеко от того места, где он ее забрал; чтобы скрыть ее в своей работе, он был вынужден изображать ее в форме гитары, кувшина или фруктового блюда или взаимосвязанных монограмм: он также изображал ее в форме своего пениса или ее влагалища.Иногда он изображал другую женщину в позе, которую он придумал для Мари-Терезы.

Летом 1927 года в Каннах с Ольгой Пикассо так скучал по своей новой девушке, что помчался обратно в Париж, чтобы быть с ней. Поездка оставила его более одержимым, чем когда-либо. Вернувшись в Канны, он заполнил два альбома для набросков одними из самых удивительных своих изображений: серией тщательно обработанных биоморфных рисунков накачанного тела Мари-Терез в облике его собственного набухшего пениса — гибридов, состоящих из эректильной ткани.Пикассо превращает свою любовницу в итифаллическую фигуру с пенисом вместо головы, в одиночестве на песчаном пляже, загорая на солнце ее эластичные конечности и раздувающиеся груди. В одной из самых зрелищных мастурбационных фантазий он уменьшает ее голову до размера горошины, установленной высоко в небе, чтобы придать ей бесконечный рост; она тянет за пляжным полотенцем и вставляет крошечный ключик в свою кабинку.

Романтика соблазнения Пикассо Мари-Терезы Вальтер не должна закрывать нам глаза на тот факт, что Пикассо жил под одной крышей с одержимо ревнивой женой, сыгравшей роль мадам Пикассо — элегантной супругой, рьяной матерью, безупречной хозяйкой — очень. очень близко к сердцу.Ольга не собиралась отказываться от этой роли, и Пикассо, у которого были испанские оговорки по поводу таких вещей, не хотел, чтобы она сделала это. Конечно, гинекологические проблемы Ольги обострились и сделали ее склонной к психологическим проблемам, но как бы Пикассо ни громил о ее недуге и ее ужасных нападках на него, его жена вдохновляла на образы, которые были гораздо более драматичными, чем его любящие и лирические образы Марии. Тереза.

Как и многие другие неверные мужья, Пикассо вскоре обнаружил, что ведет две разные жизни: как откровенно обычный père de famille , который по выходным возит жену и ребенка на модные курорты Нормандии, и скрытный богемный человек, скрывавший свою любовницу. от его друзей.Этот раздвоенный узор отразился бы в раздвоенных образах Пикассо. Образы Мари-Терезы были бы проникнуты безудержной сексуальностью, тогда как образы Ольги — предметом гораздо большего количества картин, чем люди думают, — пахли бы яростью: последствия шаманских усилий Пикассо изгнать ее проблемы.

Летом 1928 года Пикассо покинул Ривьеру ради Динара, где он держал Мари-Терезу в тайне в пансионе Pension de jeunes filles, подальше от глаз жены. Ольга, Пауло и его гувернантка держались на пляже прямо под своей виллой; Пикассо и Мария-Тереза ​​придерживались Plage de l’Ecluse с его рядами соблазнительных кабинок для переодевания.Чтобы оправдать свое ежедневное отсутствие с Ольгой, Пикассо, вероятно, арендовал студию для своей работы, а также для своих свиданий с Мари-Терез.

В Динаре Пикассо написал несколько чудесных маленьких картин с ее изображением. Сначала он изобразил ее как набор клюшек, пляжных мячей и бумерангов, а затем постепенно превратил ее в фигурку, играющую в мяч с идентичными фигурками самой себя. На одной из картин Пикассо изображает себя, сидящего на корточках внутри фаллической кабины, ожидая, чтобы поймать мяч, который она собирается бросить ему.И если прошлым летом Пикассо изобразил ее объемно, не только как мужской орган, но и как бионический газовый насос, протягивающий шланг, открывающий ее кабину, этим летом он изобразил ее в двух измерениях как вырез. На этот раз ключ в ее руке — это его домик .

Динар — или это была Мария-Тереза? — оказал на Ольгу неблагоприятное воздействие, как и в 1922 году. У нее снова начались кровоизлияния, более серьезные, чем когда-либо. Они стали настолько серьезными, что 5 сентября семья вернулась в Париж.На следующий день Ольга поступила в клинику, где ей предстояла операция, потребовавшая длительного выздоровления. Пикассо поблагодарил Гертруду Стайн за недавнее письмо: «Ольге становится лучше, но она должна остаться в клинике на какое-то время. Буду держать вас в курсе ее здоровья, но какое у нас было лето! Несмотря ни на что, я работал и покажу вам, что я сделал, когда вы вернетесь ». Это письмо также подписала Ольга, которая покинет клинику 10 октября, чтобы вернуться через месяц для второй операции.В начале декабря она вернулась домой, но ненадолго; она вернулась в клинику на Рождество.

Отсутствие Ольги решило главную проблему: Пикассо и Мария-Тереза ​​наконец-то могли видеться друг с другом так часто, как им заблагорассудится, без семейных ограничений. Воодушевленный любовью, сексом и свободой от стресса, Пикассо обратился к скульптуре. С помощью старого друга из Барселоны, скульптора Хулио Гонсалеса, он вырезал своих больших классических девочек на пляже до кошачьей колыбели из металлических прутьев, тем самым триумфально вступив в новую эру железа.

Вскоре Пикассо задумал еще одну монументальную пляжную скульптуру, но, не имея необходимых помещений, он задумал ее в красках. Поднятые вверх руки «Обнаженная у моря» представляют Мари-Терезу, а не Ольгу. Пикассо, очевидно, хотел увидеть, как его красивая, стройная молодая любовница будет усилена, если ее будут изображать в позе, определенной в более ранних работах, с его женой-балериной. Декоративный обелиск, увенчанный шаром, который был частью мебели их убежища на левом берегу, вдохновил их на коническую шею и крошечную голову, которые позволяют Мари-Терезе возвыситься в небо.Скульптурный гигантизм стал фикцией.

В начале 1929 года Ольга наконец вышла из клиники, в которой провела большую часть предыдущих четырех или пяти месяцев. Ее повторное появление вызвало некоторые из самых душераздирающих образов Пикассо. До этого его страсть к Мари-Терез генерировала психическую энергию, питавшую его работу. Но его негодование и суеверный страх перед болезнью женщин — прежде всего Ольги — оказались еще более мощным источником вдохновения. Этому способствовали истерические сцены Ольги и угрозы убить ее мужа.Неужели обезумевшая жена обнаружила, что «другая женщина» стала постоянным спутником? Ей достаточно было заглянуть в бумажник мужа, чтобы увидеть, что фотография Мари-Тереза ​​всегда была с ним, или посетить студию, чтобы увидеть ее любовные образы. «Как ужасно, — сказал мне однажды Пикассо, — что женщина осознает из моих работ, что ее вытесняют». Не то чтобы с Ольгой происходило много сомнений. Статус-кво устраивал художника. Мари-Терезу ошибочно приняли за мадам Пикассо.Ольга, возможно, чувствовала, что у ее соперницы нет супружеских амбиций, и в этом смысле она мирилась со своим существованием. Принятие не избавляло от обиды, но Ольге было легче вынести это, чем была распущенность в прошлом.

Месть

Слезы любимого человека вызывали у Пикассо хищную нежность, но слезы Ольги вызывали только вину и гнев — ярость, которую можно было унять краской. Бюст женщины с автопортретом (1929) изображает Ольгу в виде тощего суккуба с пришитыми к щекам глазами, как пуговицы, и острым как кинжал языком, торчащим из ее разинутого рта.И наоборот, Пикассо подарил своей жене, которая начала красить волосы, шиньон, окрашенный в цвет Мари-Терезы. Еще более обидно то, что он противопоставил эту пародию на Ольгу прекрасному, прохладному профилю себя, врезанного в лужу краски, более красной, чем кровь.

В другой раздвоенной голове Ольги — с выпученными глазами и маниакальностью слева, подавленной и успокоенной справа — Пикассо диагностирует ее взволнованное состояние, чтобы, возможно, лучше его изгнать. Другая похожая голова, названная The Kiss, , представляет собой гибрид: демонический темноволосый профиль Ольги слева и безмятежной светловолосой Мари-Терез справа.Они прорастают из одной шейки. Свирепость этих изображений предполагает, что, несмотря на всю свою страсть к женщинам, Пикассо, возможно, страдал от атавистического женоненавистничества, которое якобы скрывается в психике каждого полнокровного андалузского мужчины.

В двух шедеврах этой весны, Большая обнаженная в красном кресле (5 мая) и Большая купальщица (26 мая), Пикассо настраивает своих демонов против демонов Ольги. На Large Nude падают тени двух очень разных художников: Матисса и Гойи.Положение правой руки Ольги, которая без костей болтается по подлокотнику кресла, как поврежденная нога, является жестоким воспроизведением позы Одалиски Матисса с бубном. Тьма Гойи — тень, которую Пикассо редко провоцировал, — не менее сильно падает на это ярко раскрашенное произведение. Large Nude тревожно напоминает женоненавистнический шедевр этого художника, Time, или The Old Ones: карга-бедняга, смотрящая в зеркало, ее спина украшена словами Qué tal? (Что случилось?), Который ей преподносит не менее отвратительный служитель.Сходства — злобные искажения, зловеще дряблая плоть — очевидны. Направленный беспощадной испанской иронией Гойи, Пикассо в ответ на свою жену, которой чуть больше десяти лет, представил ее старой и дряхлой.

В 1930 году Пикассо купил небольшой красивый скрытый замок под названием Буа-Желуп. В часе езды к северо-западу от Парижа это было идеальное место для спокойной работы, а старые конюшни предоставили ему крайне необходимую скульптурную студию. В течение недели Мария-Тереза ​​материализовалась и выполняла свои обязанности любовницы, модели и музы.По выходным Ольга появлялась с Пауло и играла роль шатлен. Если Ольга приезжала неожиданно, Мари-Тереза ​​уезжала на велосипеде в гостиницу в Жизоре. На снимках видно, что когда Ольга была рядом, Пикассо был одет как приветливый деревенский джентльмен в элегантном костюме-тройке с цепочкой для часов и гетрами. Пауло надевал костюм тореро, жокея, арлекина, маршала Франции, или пажа XVIII века. Домашнее кино показывает шателин, выходящую из дома, с задумчивой улыбкой на лице, когда она срывает лепестки с ромашки — он любит меня; он не любит меня — душераздирающий образ, который трудно совместить с Большая обнаженная в красном кресле. Для бедной Ольги жизнь превратилась в фарс.

Предположительно, весы не падали с глаз Ольги до первой крупной ретроспективы Пикассо в Galeries Georges Petit в 1932 году. Картина за картиной не оставляли бы у нее никаких сомнений относительно внешности, если не личности, ее соперницы. Однако Бернар Пикассо, единственный законный внук Пикассо, ставит под сомнение это предположение. Он считает, что его бабушка знала о Мари-Тереза. Ольга была ревнивой и подозрительной по натуре, но дура она не была и, вероятно, наводила справки у консьержа или жителей деревни.Может быть, Пикассо сказал ей? Как еще объяснить ряды? Буа-желуп стал ассоциироваться с образами Мари-Терезы, но это никогда не было ее сферой деятельности; это была Ольга. Поскольку у Пикассо и Мари-Тереза ​​было собственное жилище, это было убежище на левом берегу, а затем квартира в нескольких домах от него на улице Боэти. Это был не Буазгелуп. По иронии судьбы, не более чем через пять лет художник уступил владение замком Ольге в качестве условия их разлуки. Их внук Бернар унаследовал это место и превратил его в чрезвычайно привлекательный и удобный дом.

Подобно многим другим женатым мужчинам, страстно влюбленным в любовницу, Пикассо неоднократно обещал жениться на Мари-Терез. Эти обещания не были выполнены. Как он сказал своей более поздней любовнице Доре Маар и своей второй жене, Жаклин Рок, он никогда не выйдет замуж повторно, пока Ольга не умрет. Испанцы не любят развод, и, хотя Пикассо обдумывал это, он передумал, когда обнаружил, что Ольга будет иметь право на половину его собственности, включая его краски, кисти и альбомы, а также его огромные запасы его собственных работ.В конце концов, он согласился на разлуку.

На Рождество 1931 года Пикассо написал одно из своих самых ужасных изображений Ольги; он основан на великой картине Жака-Луи Давида, изображающей убийство идеолога Жан-Поля Марата руками роялистки Шарлотты Корде в разгар Французской революции. Версия Пикассо, Женщина на шпильке, , обманчиво отрывочна. Помимо ранения в сердце, маленькая фигурка Марата (суррогата Пикассо) вот-вот будет схвачена в зубастой пасти Корде (суррогат Ольги).И снова Пикассо делает абсурдную вольность с масштабом. Непропорционально большая нога и ступня принадлежат крохотному Марату.

Пикассо представляет себе сочащиеся клочья красной крови, которые превращаются в красный цвет на трехцветном флаге. Этот гротескно-фарсовый образ подразумевает, что для Пикассо демоническое издевательство было наиболее эффективным способом изгнания убийственных угроз Ольги. Лучше очистить себя от гнева на холсте, чем на ней. (Когда они собирались расстаться, в 1934 году Пикассо рисовал еще более жестокий рисунок убийства Марата.На этот раз маниакальная Ольга перерезает Мари-Терезе горло огромным ножом.)

Пикассо закончил эту ужасную Женщину на стилете на Рождество. Пока он работал над этим, Ольга была занята организацией праздничного чаепития для Пауло и его друзей, а также ближайшего окружения Пикассо, возможно, пытаясь продемонстрировать, насколько они дружной семьей. Вечеринка должна была состояться 30 декабря. Сохранилась памятная записка Ольги. Среди подарков — 16 кукол, 17 игрушечных машинок, 8 уток, 10 перьевых ручек, 14 ожерелий и конфеты.Список ее гостей был столь же тщательным: 4 мальчика, 4 девочки и 18 взрослых, среди которых были Гертруда Стайн и Алиса Токлас. Катарсис «Женщина на стилете » заставил Пикассо все больше поклоняться Мари-Терез. Три дня спустя он нарисовал томный, любящий портрет ее спящей с лиловой кожей и руками, подобными плавникам. На следующий день он снова нарисовал Мари-Терезу в знаменитой картине Dream, , которую в 2006 году владелец казино в Лас-Вегасе Стив Винн проткнул локтем, собираясь продать ее за 139 миллионов долларов.

Удивительно, но Ольга продолжала жить с Пикассо. О разводе заговорили только после того, как зимой 1934–1935 годов Мария-Тереза ​​забеременела. Узнав, что их брак предусматривает « communauté des biens, », Ольга попросила своего адвоката направить судебного исполнителя для инвентаризации имущества ее мужа. Пикассо никогда бы ей не простил. Она переехала из квартиры и взяла Пауло жить с собой в соседний отель «Калифорния». Евгения Эррасурис, престарелая мать Пикассо, переехала к нему, чтобы составить ему компанию в то, что он позже описал как «самый тяжелый момент в моей жизни.В своем отчаянии Пикассо отказался от живописи ради поэзии: последовательные образы апокалиптического хаоса, непристойной сексуальной фантазии и самой черной комедии. Потребовалось начало гражданской войны в Испании в 1936 году, чтобы снова вызвать его в студию.

Ольга развалилась. В течение следующих 20 лет она будет жить частично в Буа-Желупе, частично в отелях Парижа и частично на курортах Ривьеры, которые часто посещал Пикассо, чтобы преследовать его и его последующих любовниц. Мне довелось навестить Пикассо, когда она умирала в клинике в Каннах.Мадам Рами (жена гончара Пикассо) часто видела Ольгу, чтобы держать Пикассо в курсе. Все, что у Ольги оставалось, — это тупица от парохода со старыми костюмами, пустыми флаконами от духов, письмами и сотнями фотографий. Она провела свои последние дни, лихорадочно просматривая их, умоляя мадам Рами убедить ее мужа приехать и увидеть ее. Пикассо категорически отказался. Когда она умерла, ее по ошибке похоронили на английском, а не на русском кладбище.

Что касается Мари-Тереза, то Пикассо продолжал регулярно видеться с ней и ее дочерью Майей до середины 1950-х годов.Она тоже переехала на Ривьеру, но вторая жена Пикассо, Жаклин Рок, положила конец их встречам. Смерть Пикассо в 1973 году стала ужасным ударом для Мари-Терез. Она не могла жить без него и отметила 50-летие их встречи самоубийством.

Кристаллическая структура эстеразы PMGL2 из семейства гормоночувствительных липаз с мотивом GCSAG вокруг каталитического серина

PLoS One. 2020; 15 (1): e0226838.

Константин М.Бойко

¹ Отдел энзимной инженерии, Институт биохимии Баха, Научный центр биотехнологии Российской академии наук, Москва, Россия

Крюкова Марья Владимировна

² Курчатовский комплекс NBICS-технологий, НИЦ «Курчатовский институт», Москва, Россия

Петровская Лада Евгеньевна

³ Отдел биоинженерии, Институт биоорганической химии им. Шемякина и Овчинникова РАН, Москва, Россия

Алена Ю.Николаева

² Курчатовский комплекс NBICS-технологий, НИЦ «Курчатовский институт», Москва, Россия

Корженевский Дмитрий Александрович

² Курчатовский комплекс NBICS-технологий, НИЦ «Курчатовский институт», Москва, Россия

Новотоцкая-Власова Ксения Анатольевна

⁴ Лаборатория криологии почв Института физико-химических и биологических проблем почвоведения РАН, Пущино, Московская область, Россия

Елизавета М.Ривкина

⁴ Лаборатория криологии почв Института физико-химических и биологических проблем почвоведения РАН, Пущино, Московская область, Россия

Долгих Дмитрий Александрович

³ Отдел биоинженерии, Институт биоорганической химии им. Шемякина и Овчинникова РАН, Москва, Россия

⁵ Кафедра биологии, М.В. Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

Михаил П.Кирпичников

³ Отдел биоинженерии, Институт биоорганической химии им. Шемякина и Овчинникова РАН, Москва, Россия

⁵ Кафедра биологии, М.В. Московский государственный университет им. М.В. Ломоносова, Москва, Россия

Владимир Олегович Попов

¹ Отдел энзимной инженерии, Институт биохимии Баха, Научный центр биотехнологии Российской академии наук, Москва, Россия

² Курчатовский комплекс NBICS-технологий, Национальный исследовательский центр «Курчатовский институт», Москва, Россия

Андреас Хофманн, редактор

¹ Отдел энзимной инженерии, Институт биохимии Баха, Научный центр биотехнологии Российской академии наук, Москва, Россия

² Курчатовский комплекс NBICS-технологий, НИЦ «Курчатовский институт», Москва, Россия

³ Отдел биоинженерии, Институт биоорганической химии им. Шемякина и Овчинникова РАН, Москва, Россия

⁴ Лаборатория криологии почв Института физико-химических и биологических проблем почвоведения РАН, Пущино, Московская область, Россия

⁵ Кафедра биологии, М.Московский государственный университет им. В. Ломоносова, Москва, Россия

Университет Гриффита, АВСТРАЛИЯ

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Поступила 19.09.2019; Принято 5 декабря 2019 г.

Дополнительные материалы

Файл S1: Отчет о валидации для кода PDB 6QIN. (PDF)

GUID: AB31C19E-E789-4AA7-BDE8-2E43DC8999FA

S2 Файл: Отчет о валидации для кода PDB 6QLA. (PDF)

GUID: D0A262AD-2A39-4877-84B0-A7E3D41EA1B0

S1 Рис .: Дополнительные данные. (DOCX)

GUID: B8FF174D-A7BF-402D-A64A-7DB42F802F0E

S2 Рис. Дополнительные данные.(DOCX)

GUID: 0267692E-A81F-4E33-812F-75EA89B2FFB4

Заявление о доступности данных

Все соответствующие данные находятся в рукописи и ее вспомогательных информационных файлах. Полученные трехмерные структуры депонируются в банк данных RCSB со следующими сущностями: 6QIN, 6QLA.

Abstract

Липазы представляют собой большой класс гидролитических ферментов, которые катализируют расщепление сложноэфирных связей в триацилглицеринах и находят множество биотехнологических применений.Ранее мы клонировали ген, кодирующий новую эстеразу PMGL2, из библиотеки метагеномной ДНК сибирской вечной мерзлоты. Мы определили трехмерную структуру PMGL2, который принадлежит к семейству гормоночувствительных липаз (HSL) и содержит новый вариант мотива активного сайта, GCSAG. Подобно многим другим HSL, PMGL2 образует димеры в растворе и в кристалле. Наши результаты продемонстрировали, что PMGL2 и структурно охарактеризованные члены подсемейства мотивов GTSAG обладают общим интерфейсом димеризации, который значительно отличается от интерфейса членов подсемейства GDSAG известной структуры.Более того, PMGL2 имел уникальную организацию полости активного центра со значительно отличающейся топологией по сравнению с другими липолитическими ферментами из семейства HSL с известной структурой, включая четкую ориентацию входов в активные центры внутри димера и примерно в четыре раза больший размер активных центров. полость сайта. Чтобы изучить роль остатка цистеина в мотиве GCSAG PMGL2, были исследованы каталитические свойства и структура его двойного мутанта C173T / C202S, которые оказались очень похожими на белок дикого типа.Присутствие связанной молекулы ПЭГ в активном центре мутантной формы позволило точно картировать аминокислотные остатки, образующие полость субстрата.

Введение

Микроорганизмы, населяющие экстремальные условия окружающей среды (так называемые экстремофилы), представляют особый интерес для биотехнологического применения, поскольку они обладают ферментами, способными облегчать реакции в некоторых особых и часто экстремальных условиях: при повышенной или пониженной температуре, в присутствии высокой солености или органические растворители и др. [1–4].Функциональные и структурные характеристики таких ферментов дают ценную информацию о механизмах конформационной стабильности белков и ферментативного катализа. К сожалению, выделение экстремофильных микроорганизмов во многих случаях затруднено и обычно требует разработки сложных методов и условий культивирования. Возникновение эпохи метагеномики предоставило прекрасную возможность работать напрямую с ДНК, изолированной из различных источников окружающей среды, независимо от возможности получить чистую культуру данного микроорганизма [5].В результате скрининга библиотек метагеномной ДНК, включая протеазы, целлюлазы, липазы / эстеразы и многие другие, были клонированы и получены многочисленные ферменты [6–8].

Липазы — гидролитические ферменты, катализирующие расщепление сложноэфирных связей в триацилглицеринах [9, 10]. Их можно использовать в качестве биокатализаторов в различных областях, включая пищевую промышленность, производство моющих средств, производство биотоплива и тонкий химический синтез [9–11]. Все липолитические ферменты обладают общей α / β гидролазной складкой и классифицируются на семейства I-VIII в соответствии с присутствием консервативных мотивов последовательности [12–14].К настоящему времени выяснены трехмерные структуры многих липолитических ферментов [15]. Каталитический домен липаз представляет собой β-слой из 5-11 β-цепей, окруженный α-спиралями, и содержит каноническую каталитическую триаду, которая состоит из остатков Ser-His-Asp / Glu. Доступ лиганда к полости для связывания субстрата регулируется доменом CAP (или lid), который обычно имеет α-спиральную складку [12].

Липолитические ферменты, принадлежащие к семейству IV или семейству гормоночувствительных липаз (HSL), часто выделяют из различных источников.Эти ферменты обычно предпочитают короткоцепочечные субстраты [16]. Несколько эстераз этого семейства были ранее клонированы и охарактеризованы, включая ферменты из библиотек метагеномной ДНК [17]. Общие структурные особенности этих эстераз включают консервативный мотив HGG [13, 18], который участвует в образовании оксианионной дырки, мотивы GxSxG, GGRD и FxxGxxHxxF [13, 18–20], содержащие остатки активного сайта, а также мотив YRMP [20]. , 21]. В соответствии со структурой мотива, окружающего каталитический остаток серина, члены семейства HSL далее делятся на два подсемейства с вариантами этой последовательности GD S AG и GT S AG [18, 19]; последнее подсемейство включает различные гидрофильные остатки, за исключением Asp / Glu, в положении перед каталитическим серином.Большинство HSL образуют димеры или высшие олигомеры в растворах и в кристаллах [19]. Считается, что олигомеризация важна для термостабилизации этих ферментов [22, 23]. В отличие от ферментов группы GDSAG, ферменты группы GTSAG плохо охарактеризованы [18, 19].

Сибирская вечная мерзлота — это низкотемпературная среда, населенная разнообразными микробными сообществами, которые адаптированы к экстремальным условиям, включая постоянно мерзлый грунт, ограниченную доступность органических веществ, низкую активность воды и т. Д. [24–27].Ранее мы получили и изучили несколько липолитических ферментов из психрофильной бактерии Psychrobacter cryohalolentis K5T, выделенной из криопега, закопанного в вечномерзлую почву [28]. Мы выявили различную субстратную специфичность и различные температурные оптимумы этих ферментов, демонстрируя широкий спектр ферментативной активности, который может быть обеспечен геномом даже одной бактерии [29–32]. Скрининг библиотеки метагеномной ДНК, полученной из микрокосма, образованного вечной мерзлотой, привел к клонированию нескольких генов, кодирующих потенциальные липолитические ферменты [21, 33].Среди них была получена и биохимически охарактеризована новая эстераза PMGL2, принадлежащая к семейству гормоночувствительных липаз (HSL, EC 3.1.1.79) (липазы семейства IV) [21]. Уникальной особенностью этого фермента является наличие остатка цистеина в мотиве GCSAG, который окружает консервативный каталитический серин. В соответствии с каноническим разделением этого семейства ферментов на два подсемейства с вариантами GDSAG и GTSAG мотива и с учетом того факта, что возможны замены в аминокислоте, предшествующей каталитическому серину вариантов GTSAG, мы решили отнести PMGL2 к GTSAG подсемейство.Чтобы выявить структурные особенности, связанные с этим новым мотивом последовательности, мы кристаллизовали PMGL2 дикого типа (wtPMGL2) и определили его трехмерную структуру. Это была третья структура фермента из установленного подсемейства мотивов GTSAG и первая структура с вариантом GCSAG. Чтобы пролить свет на возможную роль цистеина в этом мотиве, мы выяснили структуру мутантной формы PMGL2 (mPMGL2), где два остатка цистеина C173 (из мотива) и соседний C202 из полости активного сайта были заменены на треонин и серин соответственно.mPMGL2 не продемонстрировал структурных или биохимических различий по сравнению с ферментом дикого типа, но содержал молекулу PEG, связанную с полостью активного сайта, что позволило картировать остатки, образующие этот сайт. Наши результаты продемонстрировали, что PMGL2 и другие известные члены подсемейства мотивов GTSAG обладают общим интерфейсом димеризации, который может быть уникальной особенностью этого подсемейства в отличие от членов подсемейства GDSAG. Более того, PMGL2 имел уникальную организацию полости активного центра со значительно отличающейся топологией по сравнению с другими липолитическими ферментами из семейства IV с известной структурой.

Материалы и методы

Очистка, кристаллизация и сбор данных белка

Ген, кодирующий mPMGL2, был сконструирован стандартными методами и клонирован в вектор pET32a, аналогичный гену wtPMGL2. Рекомбинантный wtPMGL2 и его мутантную форму экспрессировали и очищали, как описано в [21]. Биохимическую характеристику мутанта проводили, как описано ранее для соответствующего белка дикого типа [21].

Первоначальный скрининг кристаллизации wtPMGL2 и mPMGL2 был выполнен с помощью роботизированной системы кристаллизации (Rigaku, США) и имеющихся в продаже 96-луночных кристаллизационных сит (Hampton Research, США) при 20 ° C с использованием метода диффузии паров в сидячей капле.Концентрация белка составляла 14 мг / мл в 20 мМ Трис, pH 8,0. Оптимизация начальных условий кристаллизации проводилась методом диффузии паров висячей капли. Оптимизированный раствор для кристаллизации содержал 250 мМ MgCl ₂ , 12% PEG3350 и 100 мМ HEPES, pH 7,5. Такие же условия использовали для кристаллизации мутантной формы фермента.

Непосредственно перед сбором данных кристаллы обеих форм PMGL2 ненадолго замачивали в маточном растворе, содержащем 25% глицерина в качестве криопротектора.Затем кристаллы охлаждали мгновенно до 100 К в жидком азоте. Данные по дифракции рентгеновских лучей были собраны на канале BL41XU синхротрона SPring8 (Harima Science Garden, Япония). Данные были проиндексированы, интегрированы и масштабированы с помощью iMOSFLM [34]. На основании L-теста [35] оба набора данных не были двойниками. Программа Pointless [36] предложила космическую группу P2 ₁ .

Статистика сбора и обработки данных обобщена в.

Таблица 1

Сбор, обработка и уточнение данных.

Решение и уточнение структуры

Структура wtPMGL2 была расшифрована с разрешением 1,60 Å методом молекулярного замещения с использованием программы MOLREP [37] с атомными координатами эстеразы EstE5 из некультивируемых бактерий. (PDB ID: 3L1H) в качестве стартовой модели.Затем структура wtPMGL2 была использована для решения mPMGL2 с разрешением 1,43 Å с помощью программы MOLREP [37]. Уточнение обеих структур проводилось с помощью программы REFMAC5 пакета CCP4 [38]. TLS был введен на ранних этапах доработки. Визуальный осмотр карт электронной плотности и ручное восстановление модели проводились с помощью интерактивной графической программы COOT [39]. Разрешение последовательно увеличивалось до 1,60 Å и 1,43 Å, соответственно, и атомы водорода в фиксированных положениях были включены во время заключительных циклов уточнения.В конечных моделях асимметричная единица содержала две независимые копии (субъединицы A и B) белка. В модели wtPMGL2 одна субъединица содержала 312, а другая — 318 видимых остатков вместе с 590 молекулами воды, одним хлоридом и двумя ионами магния из кристаллизационного раствора. В случае mPMGL2 асимметричная единица содержала две субъединицы, каждая с 319 остатками, а также один хлорид и три иона магния, две молекулы PEG из условий кристаллизации и 578 молекул воды.Некоторые N-концевые, а также C-концевые остатки, включая поли-His-метку, были невидимы в электронной плотности обеих структур, возможно, из-за их высокой гибкости. В wtPMGL2 221–226 остатков молекулы A также были невидимы по электронной плотности, в отличие от молекулы B и структуры mPMGL2, где эта область имеет плохую электронную плотность. Суперпозиция двух белковых молекул в пределах одних и тех же асимметричных единиц и между wtPMGL2 и mPMGL2 дала RMSD между атомами Cα приблизительно 0.3 Å, что свидетельствует об отсутствии больших расхождений между молекулами. Примечательно, что конформация петель 202–209 и 216–237 идентична у wtPMGL2 и mPMGL2 (см. Ниже).

Анализ и проверка структуры

Визуальный осмотр структур проводился с помощью программы COOT [39] и системы молекулярной графики PyMOL, версия 1.9.0.0 (Schrödinger, США). Выравнивание аминокислотной последовательности проводили с помощью BLAST [40] и Clustal Omega [41]. Сравнение структур и суперпозиция были выполнены с помощью программы PDBeFold [42], а контакты анализировались с помощью программ PDBePISA [43] и WHATIF [44].

Результаты

Общая структура субъединицы PMGL2

Было обнаружено, что трехмерные структуры субъединиц wtPMGL2 и его мутантного варианта mPMGL2 очень похожи (см. Раздел «Методы»). Оба они имели типичную α / β бактериальную HSL-подобную складку, состоящую из двух канонических доменов — CAP-домена и каталитического домена [16] (). Домен CAP (остатки 1–68) содержал две α-спирали (α1 и α2). Большой каталитический домен состоял из 8 β-цепей (β1-β8), окруженных 9 альфа-спиралями (α3-α11).Далее по тексту мы будем описывать обе структуры вместе как PMGL2, если не указано иное.

(A) Мультяшная диаграмма субъединицы wtPMGL2. Элементы вторичной структуры имеют цветовую кодировку (α-спираль — красный; β-тяж — желтый; петля — зеленый). Характерные мотивы последовательности выделены следующим образом: ¹⁰⁵ HGGAF ¹⁰⁹ (синий), ²⁶⁹ GGRD ²⁷² (пурпурный), ²⁹⁶ FxxGxxHxxF ³⁰⁵ (серый), ^{172 GCS ) и 137 YRLA 140 (черный).CAP-домен выделен оранжевым цветом. Петля 216–237 изображена темно-зеленым цветом. (B) Сравнение субъединицы PMGL2 (зеленый, полупрозрачный) с гомологичной структурой эстеразы E25 из метагеномной библиотеки из Южно-Китайского моря (пурпурный, запись PDB 4Q05). Ориентация wtPMGL2 аналогична панели A. Петля 216–237 wtPMGL2 выделена синим, а соответствующая петля 4Q05 — красным.}

Сравнение структуры PMGL2 со структурами гомологов ферментов с использованием PDBeFold показало, что, несмотря на низкую идентичность последовательностей (), фермент был структурно очень похож на бактериальные ферменты HSL (bHSL), полученные из различных метагеномных библиотек ().Суперпозиция структур показала, что элементы вторичной структуры субъединицы PMGL2 занимают примерно те же пространственные положения, что и в структурах гомологичных ферментов (). Основные различия были обнаружены в петлях 202–209 и 216–237 каталитического домена. В случае PMGL2 эти петли имели строго уникальные конформации по сравнению с другими известными bHSL (). В других bHSLs область, соответствующая 216–237 в PMGL2, хорошо упорядочена, содержит дополнительную α-спираль и покрывает полость активного сайта, формируя многочисленные взаимодействия с другими частями белковой субъединицы.Напротив, в PMGL2 эта область была ориентирована от белка, почти не взаимодействовала с остальной частью белковой субъединицы и, таким образом, резко расширяла вход в активный сайт (см. Ниже).

Степень сохранения аминокислотной последовательности показана синим цветом. Элементы вторичной структуры PMGL2 указаны вверху. Черными кружками отмечены аминокислотные остатки, принадлежащие каталитической триаде.

Таблица 2

Сравнение структуры PMGL2 со структурами гомологичных ферментов.